{"id":385,"date":"2022-04-15T16:55:55","date_gmt":"2022-04-15T09:55:55","guid":{"rendered":"https:\/\/cattleyapublicationservices.com\/?p=385"},"modified":"2022-07-10T13:41:42","modified_gmt":"2022-07-10T06:41:42","slug":"cara-mudah-teknik-isolasi-dna","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/cattleyapublicationservices.com\/?p=385","title":{"rendered":"Cara Mudah Teknik Isolasi DNA"},"content":{"rendered":"\n

DNA adalah asam nukleat yang mengandung materi genetik dan berfungsi untuk mengatur perkembangan biologis seluruh bentuk kehidupan. DNA terdapat di nukleus, mitokondria, dan kloroplas. Ada perbedaan di antara ketiga lokasi DNA ini, yaitu: DNA nukleus berbentuk linear dan berhubungan sangat erat dengan protein histon, sedangkan DNA mitokondria dan kloroplas berbentuk sirkular dan tidak berhubungan dengan protein histon. DNA memiliki struktur helix utas ganda, yang mengandung komponen-komponen gula pentosa (deoksiribosa), gugus fosfat, dan pasangan basa. Satu sel memiliki DNA yang merupakan materi genetik dan akan diturunkan pada keturunannya. DNA dapat diisolasi, baik pada manusia maupun tumbuhan.<\/p>\n\n\n\n

Isolasi DNA merupakan langkah tepat untuk mempelajari DNA. Prinsipnya ada dua, yaitu :<\/p>\n\n\n\n

a.Sentrifugasi
Merupakan teknik untuk memisahkan campuran berdasarkan berat molekul komponennya. Molekul yang mempunyai berat molekul besar akan berada di bagian bawah tabung dan molekul ringan akan berada pada bagian atas tabung. Teknik sentrifugasi dilakukan oleh mesin yaitu mesin sentrifugasi dengan kecepatan yang bervariasi. Hasil sentrifugasi akan menunjukkan dua macam fraksi yang terpisah, yaitu supernatan di bagian atas dan pelet di bagian bawah.<\/p>\n\n\n\n


b. Presipitasi
Merupakan langkah yang dilakukan untuk mengendapkan suatu komponen dari campuran.<\/p>\n\n\n\n

\"\"
Eureka Research Lab-HLM, KLIK DISINI<\/a><\/figcaption><\/figure>\n\n\n\n

Tahap Isolasi DNA Darah :<\/p>\n\n\n\n

  1. Gunakan tabung mikrosentrifus 1,5 ml yang steril \u2014 isi dengan 1 mg anti-koagulan
    (EDTA, atau heparin) \u2014 masukkan 1 ml darah kedalamnya.<\/li>
  2. Goyangkan tabung mikrosentrifus perlahan agar darah dan anti-koagulan bercampur
    dengan baik.<\/li>
  3. Gunakan satu tabung mikrosentrifus steril lagi\u2014\u2013 masukkan 900 \u03bcL larutan sel lisis<\/li>
  4. Ambil 300 \u03bc1 darah dari tabung mikrosentrifus pertama \u2014- masukkan ke dalam tabung
    kedua \u2014\u2013 bolak-balikkan tabung 5-6 kali supaya cairannya bercampur baik.<\/li>
  5. Inkubasikan tabung mikrosentrifus kedua selama 10 menit pada temperatur ruang \u2014\u2013
    bolak-balikkan tabung 2-3 kali selama masa inkubasi \u2014- untuk melisis sel-sel darah
    merah.<\/li>
  6. Sentrifugasi tabung pada kecepatan 13.500 rpm selama 2 menit pada temperatur ruang.<\/li>
  7. Supernatant dibuang sebanyak mungkin (hati-hati! Jangan sampai pellet putih ikut
    terbuang) \u2014\u2013 sekitar 10-20 \u03bcl cairan residu akan tertinggal dalam tabung tersebut<\/li>
  8. Tabung divortex dengan kuat (10-15 detik) \u2014- agar sel-sel darah putih tersuspensi
    kembali.<\/li>
  9. Tambahkan 300 \u03bc1 larutan nuklei lisis ke dalam tabung tersebut (di langkah ke-8).\u2014\u2013
    campurkan dengan menggunakan pipet sebanyak 5-6 kali untuk melisiskan sel-sel darah
    putih \u2014 larutan menjadi \u201cviscous\u201d (kental) \u2014- jika terlihat gumpalan, maka inkubasikan
    tabung pada 37 \u00b0C sampai gumpalan tersebut larut \u2014- dinginkan pada temperatur ruangan<\/li>
  10. Tambahkan larutan \u201cprotein precipitation\u201d sebanyak 100 \u03bc1 ke dalam larutan di langkah
    9 \u2014\u2013 vortex dengan kuat selama 10-20 detik \u2014\u2013 gumpalan protein yang kecil mungkin
    akan terlihat.<\/li>
  11. Sentrifugasi pada kecepatan 13.500 rpm selama 3 menit (pada temperatur ruangan) \u2014\u2013
    pellet protein yang berwarna coklat tua akan terlihat.<\/li>
  12. Pindahkan supernatant ke dalam tabung Eppendorf steril (tabung mikrosentrifus 1,5 ml)
    yang diisi 300 \u03bcl isopropanol (temperatur ruangan).<\/li>
  13. Tabung dibalikkan perlahan-lahan \u2014- supaya larutan bercampur \u2014 akan terlihat massa
    seperti benang-benang putih (DNA).<\/li>
  14. Sentrifugasi pada kecepatan 13.500 rpm selama 1 menit pada temperatur ruangan \u2014-
    DNA akan terlihat sebagai pellet kecil yang putih.<\/li>
  15. Supernatant dibuang \u2014 tambahkan 300 \u03bcl 70% etanol (di suhu temperatur ruangan). \u2014-
    bolak-balikkan tabung perlahan beberapa kali untuk mencuci pellet DNA \u2014- sentrifugasi
    lagi seperti pada langkah 15 diatas.<\/li>
  16. Aspirasikan etanol menggunakan pipet (jangan sampai pelletnya terbuang!) \u2014- letakkan
    tabung secara terbalik diatas kertas absorben dan keringkan di udara selama 10-15 menit.<\/li>
  17. Tambahkan 100 \u03bcl larutan rehidrasi DNA \u2014 DNA direhidrasi dengan menginkubasikan
    tabung pada 65 \u00b0C selama 30-60 menit \u2014- secara periodik, campurkan larutan dengan
    cara menepuk tabung perlahan.<\/li>
  18. DNA disimpan pada temperatur 2-8\u00b0C atau untuk jangka panjang pada -20\u00b0C.<\/li><\/ol>\n\n\n\n

    Apabila pembaca mendapatkan informasi dan ilmu dari artikel ini, mohon kiranya bersedia untuk mengapresiasi serta berdonasi bagi kemajuan ilmu pengetahuan, cukup dengan klik salah satu iklan di halaman ini atau website ini.<\/p>\n\n\n\n

    \n