ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) merupakan suatu teknik yang digunakan untuk menilai kuantifikasi kadar peptida, protein, antibodi dan hormon, berdasarkan prinsip ikatan antigen-antibodi. Pada teknik ELISA akan dilakukan imobilisasi antigen pada permukaan yang solid, selanjutnya akan diikat dengan antibodi sehingga terbentuk kompleks ikatan antigen-antibodi, dimana kompleks antigen-antibodi ini terikat dengan enzim. Sinyal deteksi berupa perubahan warna akan terbentuk akibat reaksi antara enzim dengan substrat.
ELISA umumnya dilakukan pada plate yang berisi sumuran sebanyak 96 sumuran, dimana pada sumuran tersebut akan terjadi proses ikatan antibodi dengan protein. Proses yang amat sederhana ini, membuat ELISA menjadi mudah untuk dilakukan. Kemudahan ELISA untuk dilakukan pencucian, sehingga memudahkan untuk membersihkan material-material yang terikut saat dilakukan pengujian. Hal ini akan membuat pengujian dengan ELISA menjadi spesifik.
Prosedur Umum Pemeriksaan ELISA
Prosedur pemeriksaan ELISA diawali dengan proses penempelan (coating) antigen dan atau antibodi pada permukaan sumuran pada plate. Selanjutnya, dilakukan tahapan blocking (pengeblokan) ikatan antigen dan antibodi pada unspecific-site dengan blocking agent. Setelah dilakukan inkubasi dan pencucian, plate diinkubasi dengan antibodi yang terikat dengan enzim. Selanjutnya, dilakukan pencucian plate dan dilanjutkan dengan penambahan substrate sehingga akan dihasilkan perubahan warna dan akan didapatkan nilai OD (optical density) yang dibaca dengan ELISA reader. Tahapan pencucian merupakan salah satu yang penting untuk menghilangkan antibodi yang tidak terikat dengan antigen. Selain itu, pastikan agar tidak ada cairan pencuci yang tertinggal pada plate, karena dikhawatirkan akan mempengaruhi tahapan pemeriksaan selanjutnya.
Terminologi
- Plate ELISA : suatu wadah tempat dilakukan pengumpulan antigen-antibodi, yang umumnya berisi 96 sumuran uji.
- Antigen : Suatu protein yang akan dinilai kadarnya, yang berasal dari sampel yang akan diuji. Apabila kita akan menilai kadar IL-12 dengan menggunakan ELISA dari sampel serum, maka IL-12 yang terdapat pada serum kita istilahkan dengan antigen.
- Antibodi : Suatu protein yang akan mengikat antigen. Apabila kita akan menilai kadar IL-12 dengan menggunakan ELISA dari sampel serum, selanjutnya akan ditambahkan antibodi, maka antibodi tersebut ialah suatu protein yang akan mengikat IL-12, atau dikenal dengan istilah anti-IL-12.
- Standard : Suatu protein yang akan dinilai kadarnya, yang telah diketahui kadarnya. Apabila kita akan menilai kadar IL-12 dengan menggunakan ELISA dari sampel serum, maka standard ialah protein IL-12 yang telah diketahui kadarnya, misalnya kadar standard IL-12 ialah 100 pg/mL. Umumnya, standard ini akan dibuat menjadi beberapa konsentrasi, sehingga akan didapatkan grafik yang menggambarkan kadar standard VS nilai OD dari standard. Grafik tersebut akan digunakan untuk menghitung kadar pada sampel.
- Nilai OD (Optical Density) : suatu nilai yang menggambarkan intensitas perubahan warna pada ELISA.
- ELISA reader : Alat yang digunakan untuk mendapatkan nilai OD dari pemeriksaan ELISA.
Apabila pembaca mendapatkan informasi dan ilmu dari artikel ini, mohon kiranya bersedia untuk mengapresiasi serta berdonasi bagi kemajuan ilmu pengetahuan, cukup dengan klik salah satu iklan di halaman ini atau website ini.
